葡聚糖凝膠過濾層析填料蛋白純化脫鹽柱

Prepacked Desalting Column 葡聚糖凝膠過濾層析填料蛋白純化脫鹽柱簡介

Prepacked Desalting Column適用于分子量大于5000Da的蛋白或其他大分子樣品的脫鹽、緩沖液置換或小分子的去除。

Prepacked Desalting Column 葡聚糖凝膠過濾層析填料蛋白純化脫鹽柱裝有8.3 ml Smartdex G-25中。Smartdex G-25系列介質是以葡聚糖為基質的凝膠過濾層析介質，其工作原理主要是利用具有網狀結構的葡聚糖凝膠的分子篩作用，根據被分離物質的分子大小不同來進 行分離。

表 1. Prepacked Desalting Column 產品性能

2. 使用說明

2.1緩沖液的準備

所用水和緩沖液在使用之前建議用0.22 pm或0.45 pm濾膜過濾。 平衡液為蛋白脫鹽后，用于保護蛋白的溶液，根據客戶需求自行選擇。

2.2樣品準備

樣品在上樣前建議離心或用0.22 pm或0.45|jiti濾膜過濾，減少雜質，防止堵塞柱子。

2.3樣品脫鹽

圖1.使用Prepacked Desalting Column脫鹽流程示意圖

1） 脫鹽柱準備

將Prepacked Desalting Column垂直置于重力柱支架上，或用鐵架臺固定，先后打開上蓋、下蓋，依靠重力流干保護液。

2） 平衡

加入4 ml平衡液（自主選擇合適溶液）對預裝介質進行平衡，重復5次，最終使用平衡液體積約3倍介質體積。

3） 上樣

加入樣品，樣品上樣體積范圍1.0-2.5 ml,最大不超過2.5 ml,上樣體積不足時用平衡液稀釋樣品至1.0 mlo

4） 洗脫

待樣品進入填料后，繼續(xù)加入平衡液進行洗脫，分管收集洗脫液，從加入樣品開始，先收集前端2.0 ml,然后再按照固定體積（建議0.5-1 ml/管）收集樣品，檢測每管蛋白濃度和鹽濃度，計算回收率和脫鹽效率。平衡液至少添加至蛋白洗脫*再停止。

5） 再平衡

加入4 ml平衡液對介質進行再平衡，重復至少5次，將殘留的鹽沖洗干凈，方可進行下一次脫鹽。同一個柱子不建議用于不同樣品的脫鹽。

3. 清洗及保存

如果柱子的流速或者脫鹽效果變差，為除去殘留的雜質，如變性蛋白或脂質等，有時需要對脫鹽柱進行在位清洗。常用的清洗液為0.1-0.2 M NaOH或非離子型去垢劑。

1） 加入一倍的柱體積0.1-0.2 M NaOH,依靠重力清洗介質。

2） 加入足夠量的去離子水，沖洗介質，直至pH值至中性。

3） 加入至少三倍柱體積20%乙醇溶液沖洗介質，然后蓋好上蓋和下塞，在介質上端保留至少1cm高的20%乙醇保護液，置于2-8°C保存。 注：不建議介質多次重復再生和使用。

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