破骨細(xì)胞是骨吸收的主要功能細(xì)胞，在骨發(fā)育、生長(zhǎng)、修復(fù)、重建中起著重要的作用。由于破骨細(xì)胞在體內(nèi)數(shù)量較少且分離困難，目前常用的誘導(dǎo)法之一是利用RAW264.7細(xì)胞系進(jìn)行破骨細(xì)胞培養(yǎng)。本文重點(diǎn)介紹了RAW264.7細(xì)胞系誘導(dǎo)法，以及調(diào)節(jié)信號(hào)通路中起關(guān)鍵作用的細(xì)胞因子。
破骨細(xì)胞是調(diào)節(jié)骨組織代謝的重要細(xì)胞類型，在骨發(fā)育、生長(zhǎng)、修復(fù)和重建中起著至關(guān)重要的作用。然而，由于破骨細(xì)胞在體內(nèi)數(shù)量少且分離困難，研究者需要尋找合適的方法來(lái)進(jìn)行破骨細(xì)胞的培養(yǎng)。近年來(lái)，利用RAW264.7細(xì)胞系進(jìn)行破骨細(xì)胞培養(yǎng)的方法逐漸被廣泛采用。本文將著重介紹RAW264.7細(xì)胞系誘導(dǎo)法，并重點(diǎn)探討在誘導(dǎo)過(guò)程中起關(guān)鍵作用的調(diào)節(jié)信號(hào)通路中的細(xì)胞因子。
RAW264.7細(xì)胞系誘導(dǎo)培養(yǎng)破骨細(xì)胞的步驟：
RAW264.7細(xì)胞系是一種乳腺腺癌細(xì)胞系，廣泛用于巨噬細(xì)胞相關(guān)研究。采用RAW264.7細(xì)胞系進(jìn)行破骨細(xì)胞培養(yǎng)需要添加適當(dāng)?shù)募?xì)胞因子來(lái)誘導(dǎo)其分化為功能成熟的破骨細(xì)胞。使用RAW264.7細(xì)胞系誘導(dǎo)法的關(guān)鍵步驟：
1. 細(xì)胞的預(yù)處理：將RAW264.7細(xì)胞系培養(yǎng)至合適的濃度，將細(xì)胞接種于培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)至細(xì)胞充分附著并達(dá)到80%以上的密度。
2. 細(xì)胞的誘導(dǎo)與刺激：將培養(yǎng)基中的血清濃度減少至1%以下，添加誘導(dǎo)因子，如M-CSF、RANKL等，使細(xì)胞進(jìn)入破骨細(xì)胞分化的途徑。
3. 培養(yǎng)條件的調(diào)節(jié)：為了增強(qiáng)細(xì)胞分化和提高破骨細(xì)胞生成的效率，還可以調(diào)節(jié)培養(yǎng)條件、
4. 細(xì)胞的培養(yǎng)時(shí)間：在誘導(dǎo)過(guò)程中，需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)的需求和細(xì)胞反應(yīng)的特點(diǎn)確定合適的培養(yǎng)時(shí)間。通常情況下，誘導(dǎo)時(shí)間為4-7天。在培養(yǎng)期間，細(xì)胞的形態(tài)和功能會(huì)發(fā)生明顯的變化，可以通過(guò)顯微鏡觀察細(xì)胞的巨噬細(xì)胞樣形態(tài)特征來(lái)判定破骨細(xì)胞的分化程度。
5. 細(xì)胞的檢測(cè)與鑒定：在培養(yǎng)后期，使用特定染色劑（如骨質(zhì)黏著素（tartrate-resistant acid phosphatase, TRAP）染色）來(lái)檢測(cè)破骨細(xì)胞的存在和活性。此外，還可以通過(guò)其他方法如免疫熒光染色或酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）來(lái)檢測(cè)破骨細(xì)胞特異性標(biāo)志物的表達(dá)水平。
6. 數(shù)據(jù)分析與結(jié)果解讀：通過(guò)對(duì)破骨細(xì)胞的形態(tài)特征、特異性標(biāo)志物的表達(dá)以及功能活性的檢測(cè)，可以評(píng)估RAW264.7細(xì)胞系誘導(dǎo)法的成功程度，并進(jìn)一步研究破骨細(xì)胞的功能和作用機(jī)制。
RAW264.7細(xì)胞系誘導(dǎo)法是一種常用的破骨細(xì)胞培養(yǎng)方法，通過(guò)加入適當(dāng)?shù)恼T導(dǎo)因子，可以促使RAW264.7細(xì)胞系分化為破骨細(xì)胞。然而，需要注意的是，RAW264.7細(xì)胞系雖然具有一定的相似性，但與體內(nèi)破骨細(xì)胞還存在一定的差異。因此，在使用RAW264.7細(xì)胞系進(jìn)行研究時(shí)，需要結(jié)合其他實(shí)驗(yàn)方法和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證據(jù)進(jìn)行結(jié)果的解讀和驗(yàn)證。
RAW264.7細(xì)胞系誘導(dǎo)法是研究破骨細(xì)胞的重要方法之一。通過(guò)添加適當(dāng)?shù)恼T導(dǎo)因子和優(yōu)化培養(yǎng)條件，可以使RAW264.7細(xì)胞系分化為具有破骨細(xì)胞特征和功能的細(xì)胞群。此方法為骨代謝機(jī)制的研究以及代謝性骨疾病的研究提供了有力工具，并有望為骨相關(guān)醫(yī)學(xué)研究提供新的思路和策略。
蘇州阿爾法生物十五年來(lái)一直致力于銷售各類實(shí)驗(yàn)室儀器、實(shí)驗(yàn)室設(shè)備、細(xì)胞培養(yǎng)耗材、試劑、高品質(zhì)進(jìn)口移液器及其相關(guān)耗材。比如在移液槍領(lǐng)域，我們作為梅特勒瑞寧移液器的授權(quán)代理商，可以提供單道移液器、8道移液器、12道移液器、間距可調(diào)移液器、電動(dòng)移液器、微量移液器、移液工作臺(tái)等各種型號(hào)，以及移液過(guò)程中移液槍配套的LTS盒裝吸頭、袋裝吸頭、進(jìn)口吸頭等耗材，滿足客戶在科研、醫(yī)學(xué)、制藥等領(lǐng)域的移液需求。另外還提供提供500多種腫瘤細(xì)胞，200多種基因編輯細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)試劑、細(xì)胞培養(yǎng)耗材、細(xì)胞培養(yǎng)搖床、生物反應(yīng)器、實(shí)驗(yàn)室儀器、實(shí)驗(yàn)室設(shè)備、實(shí)驗(yàn)室消毒劑等。
參考文獻(xiàn)：
1. Zhou Z, et al. (2020). RAW264.7 Macrophage-Derived Exosomal miR-155 Regulates Osteoclastogenesis and Bone Resorption via Targeting SOCS1. Frontiers in Cell and Developmental Biology, 8: 614.
2. Boyce BF, et al. (2015). Osteoclasts and Their Differentiation. In: Bone Research Protocols, Methods in Molecular Biology, vol. 1130. Humana Press.
3. Takayanagi H, et al. (2021). Signaling Pathways in Osteoclasts and the Role in Bone Homeostasis. Trends in Molecular Medicine, 27(5): 443-459.
