細(xì)胞培養(yǎng)需要注意什么
細(xì)胞培養(yǎng)需要注意什么
細(xì)胞培養(yǎng)是細(xì)胞和分子生物學(xué)中使用的關(guān)鍵工具。它可以對(duì)細(xì)胞生理學(xué)和細(xì)胞生物化學(xué)進(jìn)行建模。此外，細(xì)胞培養(yǎng)使研究人員能夠確定藥物和有毒化合物對(duì)細(xì)胞反應(yīng)的影響。那么怎么培養(yǎng)出一批好的細(xì)胞呢？細(xì)胞培養(yǎng)需要注意什么？
細(xì)胞培養(yǎng)需要注意以下幾點(diǎn)：
一、細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境
不同的細(xì)胞，培養(yǎng)環(huán)境是不同的。這個(gè)不僅僅是說培養(yǎng)基的不同，還有就是細(xì)胞生長(zhǎng)的空間密度問題。有一些細(xì)胞是數(shù)量多一點(diǎn)比較好生長(zhǎng)，生長(zhǎng)狀態(tài)也比較好。這種一般是屬于生長(zhǎng)速度慢的細(xì)胞，比如：內(nèi)皮細(xì)胞。而有一些是細(xì)胞是數(shù)量少一點(diǎn)細(xì)胞狀態(tài)會(huì)生長(zhǎng)的比較好，例如：巨噬細(xì)胞和某些腫瘤細(xì)胞。尤其是巨噬細(xì)胞，生長(zhǎng)速度快，貼壁速度也快，所以傳代時(shí)就應(yīng)該留很少量的細(xì)胞，這樣細(xì)胞狀態(tài)會(huì)比較好。并且巨噬細(xì)胞比較喜歡扎堆生長(zhǎng)，而堆與堆之間是有空間的。如果長(zhǎng)成相連在一起的一滿片的時(shí)候，細(xì)胞形態(tài)基本上就會(huì)差了，老化的會(huì)比較多，對(duì)后期實(shí)驗(yàn)結(jié)果是不好的。所以進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)的時(shí)候應(yīng)該多探索該細(xì)胞喜歡的生長(zhǎng)空間密度和生長(zhǎng)規(guī)律等相關(guān)問題，才能培養(yǎng)出理想的細(xì)胞。
二、良好的細(xì)胞形態(tài)
對(duì)于有些人總是會(huì)遇到養(yǎng)的細(xì)胞形態(tài)怎么都不好的問題。這個(gè)其實(shí)是有一個(gè)方法可以改善的。對(duì)于貼壁細(xì)胞，如果細(xì)胞形態(tài)不好，（或者細(xì)胞形態(tài)不清晰，表面似有異物等）可以在傳代的時(shí)候進(jìn)行如下操作：
1.倒掉舊的培養(yǎng)基，加入3ml新的培養(yǎng)基（有無血清的都可）洗滌一次，用滴管吸走，然后再加入3ml的培養(yǎng)基，進(jìn)行預(yù)吹打，控制吹打力度，輕輕地大概沿著瓶底過一遍，然后吸走。這時(shí)侯再開始正式的消化、吹打。（巨噬細(xì)胞我們只吹打，不消化的）
2.把吹打下來的細(xì)胞懸液加入到新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，培養(yǎng)瓶事先加入培養(yǎng)基，放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，按時(shí)間點(diǎn)觀察細(xì)胞貼壁情況。10分鐘觀察一次，20分鐘，30分鐘觀察一次。選擇一個(gè)時(shí)間點(diǎn)，已經(jīng)有部分細(xì)胞貼壁的情況下，重新置于潔凈臺(tái)，底面朝上迅速倒出其中的培養(yǎng)基，加入3ml新培養(yǎng)基再輕輕洗一次。然后加入培養(yǎng)基培養(yǎng)。后續(xù)觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況以及形態(tài)。
3.如果一次效果還不理想，可重復(fù)多次，直到找到細(xì)胞合適的形態(tài)。這里需要注意的是要結(jié)合細(xì)胞的生長(zhǎng)情況而定。
三、培養(yǎng)基的量
由于每種細(xì)胞的生長(zhǎng)環(huán)境不同，對(duì)養(yǎng)料需求也是不相同的，這就需要我們?nèi)≌J(rèn)真了解每種細(xì)胞系的特性，根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)需求及細(xì)胞特性來選擇培養(yǎng)基類型和適宜的培養(yǎng)基添加劑。關(guān)于培養(yǎng)容器并不是小的玻璃方瓶12ml，大方瓶14ml的。有些細(xì)胞反而是培養(yǎng)基少一點(diǎn)，細(xì)胞形態(tài)會(huì)長(zhǎng)得更好。（可對(duì)于生長(zhǎng)速度快的細(xì)胞，易生長(zhǎng)的細(xì)胞加少一點(diǎn)培養(yǎng)基細(xì)胞形態(tài)會(huì)更好。但是需要注意及時(shí)補(bǔ)液、換液，避免細(xì)胞死亡。
四、細(xì)胞培養(yǎng)瓶的選擇
在實(shí)驗(yàn)過程中你常常會(huì)發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)生長(zhǎng)速度快的細(xì)胞在玻璃瓶?jī)?nèi)生長(zhǎng)的狀態(tài)會(huì)比一次性塑料瓶相對(duì)好一些。而對(duì)于同一種細(xì)胞，在其生長(zhǎng)旺盛快速的時(shí)期在玻璃瓶?jī)?nèi)的生長(zhǎng)狀態(tài)也比塑料瓶?jī)?nèi)好。這可能是因?yàn)樗芰掀勘炔Ａ扛菀踪N壁。生長(zhǎng)速度快的細(xì)胞在塑料瓶這種相對(duì)“更安逸"的環(huán)境里反而長(zhǎng)得狀態(tài)不如玻璃瓶好。
所以對(duì)于生長(zhǎng)速度慢的細(xì)胞如果想要更漂亮的細(xì)胞狀態(tài)，塑料瓶比玻璃瓶會(huì)好，對(duì)于生長(zhǎng)速度快的細(xì)胞，玻璃瓶則會(huì)更好。同樣，對(duì)于同一種細(xì)胞，在其生長(zhǎng)速度慢的時(shí)候，塑料瓶會(huì)好一點(diǎn)，比如剛剛復(fù)蘇的時(shí)候，或者原代培養(yǎng)的時(shí)候。而在其生長(zhǎng)旺盛的時(shí)候，玻璃瓶則相對(duì)會(huì)好一點(diǎn)。掌握了上面這些小技巧，就能培養(yǎng)出漂亮的細(xì)胞了。
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