細胞轉(zhuǎn)染效率低的原因

細胞轉(zhuǎn)染效率低的原因

 細胞轉(zhuǎn)染實驗是指將DNA、RNA等外源物質(zhì)通過電轉(zhuǎn)染或化學(xué)轉(zhuǎn)染的方式導(dǎo)入至細胞內(nèi)的實驗方法。不同的細胞系轉(zhuǎn)染難度也各部相同，尤其是對生長條件要求較為苛刻的細胞，比如原代細胞的轉(zhuǎn)染效率會遠低于其他細胞。這里， 盤點了一下那些可能導(dǎo)致細胞轉(zhuǎn)染效率低的原因、轉(zhuǎn)染試劑選擇指南，以便提升您的細胞轉(zhuǎn)染效率。 

一、實驗條件和操作方法不合規(guī)
正常情況下，做細胞轉(zhuǎn)染實驗前需要充足的準(zhǔn)備，比如：細胞、DNA、轉(zhuǎn)染試劑、培養(yǎng)基等。除了合規(guī)的實驗條件以外，還有較為重要的就是實驗操作方法，實驗是一個較為嚴謹?shù)倪^程，所以每一步的操作步驟都要嚴格按照操作規(guī)程和說明書進行操作，才能避免人為原因所造成的失誤。
二、細胞活性不足，細胞密度不足
細胞的生長狀態(tài)對細胞的轉(zhuǎn)染效率的影響較大，細胞長勢弱或者細胞的鋪板密度過低，可能會轉(zhuǎn)染試劑的細胞毒性而導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率過低，甚至轉(zhuǎn)染失敗。因此細胞轉(zhuǎn)染時機應(yīng)在細胞的對數(shù)生長期，細胞的鋪板密度一般以90%-95左右為宜。
三、轉(zhuǎn)染的DNA或RNA濃度過低、質(zhì)量過低
如果轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的DNA或RNA的純度不夠，其中的其它外源物質(zhì)可能會干擾細胞造成輕微的細胞毒性，進而影響到細胞的轉(zhuǎn)染效率。正常情況下，用于細胞轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒濃度應(yīng)大于500ng/ul。在做RNA轉(zhuǎn)染實驗時，可以嘗試Lip RNAiMAX Transfection Reagent試劑，這類試劑的細胞毒性較低，轉(zhuǎn)染效率較高，并且操作簡單易于優(yōu)化，比較適用于高通量轉(zhuǎn)染。

四、細胞本身轉(zhuǎn)染難度大 
細胞轉(zhuǎn)染效率低的原因還跟需要轉(zhuǎn)染的細胞類型有關(guān)。細胞類型的不同，轉(zhuǎn)染效率也會有較大差別。尤其是MSC細胞、PSC干細胞、神經(jīng)干細胞、原代細胞等， 對于一些較難轉(zhuǎn)染的細胞，可以嘗試高效率的轉(zhuǎn)染試劑或者使用其他轉(zhuǎn)染方法，靈活變化。比如：使用Lipofectamine  Stem試劑。
五、轉(zhuǎn)染試劑選擇不當(dāng)
轉(zhuǎn)染試劑的選擇時保證細胞轉(zhuǎn)染效率的關(guān)鍵，低質(zhì)量的轉(zhuǎn)染試劑可能具有較強的細胞毒性，操作過程繁雜，出現(xiàn)轉(zhuǎn)染效果不穩(wěn)定等現(xiàn)象，遇到難轉(zhuǎn)細胞系甚至出現(xiàn)轉(zhuǎn)染失敗。實驗室里經(jīng)常使用的LIP2000，LIP3000的轉(zhuǎn)染試采用脂質(zhì)體納米顆粒技術(shù)，能夠?qū)⑥D(zhuǎn)染的效率提升10倍作用，比較適合用于HEK293、原代細胞、干細胞等難以轉(zhuǎn)染的細胞類型，并且還具有可重復(fù)性。
        以上總結(jié)的是一些常見的影響細胞轉(zhuǎn)染效率的因素，可供實驗參考，更多關(guān)于細胞轉(zhuǎn)染效率的原因 、LIP3000、LIP2000相關(guān)產(chǎn)品需求可進入蘇州阿爾法生物網(wǎng)站。