動物細(xì)胞培養(yǎng)需要的實(shí)驗(yàn)室設(shè)備和耗材清單

用于動物細(xì)胞培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)室設(shè)備和耗材有很多種，進(jìn)行動物細(xì)胞培養(yǎng)所需的基本設(shè)備如下：

動物細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室所需基本設(shè)備清單：

• 無菌工作區(qū)/細(xì)胞培養(yǎng)罩（即層流罩或生物安全柜）

• 培養(yǎng)箱（推薦使用潮濕的二氧化碳培養(yǎng)箱）

• 水浴

• 離心機(jī)

• 冰箱和冰柜 (–20°C)

• 細(xì)胞計(jì)數(shù)器（例如自動細(xì)胞計(jì)數(shù)器或血細(xì)胞計(jì)數(shù)器）

• 倒置顯微鏡

• 液氮 (N 2 ) 冷凍箱或低溫儲存容器

1、滅菌器（即高壓滅菌器）
細(xì)胞培養(yǎng)所需的無菌工作區(qū)：
為了保持清潔的細(xì)胞培養(yǎng)工作，如果可能，有必要準(zhǔn)備一個單獨(dú)的房間或空間。
這個房間應(yīng)該是密閉的，另外需要配備一個氣流柜，已提供潔凈的空氣，一些實(shí)驗(yàn)室還會采用HEPA空氣過濾器。實(shí)驗(yàn)室必須是為潔培養(yǎng)工作二設(shè)計(jì)，嚴(yán)格限制在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)或附近培養(yǎng)原代動物組織和微生物。
實(shí)驗(yàn)室外套應(yīng)放在實(shí)驗(yàn)室入口處，不得在實(shí)驗(yàn)室外使用。
生物安全柜既可以提供無菌的條件，而且還可以控制傳染性的飛濺物或氣溶膠。
為滿足多樣化的研究需要，生物安全柜一般有I、II、III三類。
I 類層安全柜為實(shí)驗(yàn)室工作人員和環(huán)境提供了基本水平的保護(hù)，但它們不能保護(hù)培養(yǎng)物免受污染。 它們在設(shè)計(jì)和氣流特性方面與化學(xué)通風(fēng)柜基本相同。
對于涉及 BSL-1、2 和 3 材料的工作或者細(xì)胞培養(yǎng)時為了處理有害物質(zhì)（例如，靈長類動物培養(yǎng)物、病毒感染培養(yǎng)物、放射性同位素、致癌或有毒試劑），應(yīng)使用 II 類生物安全柜。
清潔工作臺：垂直層流或水平層流潔凈工作臺是將經(jīng)過 HEPA 過濾的空氣從機(jī)柜后部穿過工作臺表面有助于保護(hù)樣品而不是工作人員。

2.振蕩培養(yǎng)箱：
為了在 30-40 0 C下為細(xì)胞生長提供合適的溫度環(huán)境，需要一個培養(yǎng)箱。
根據(jù)培養(yǎng)的細(xì)胞類型，孵育溫度會有所不同。
CO2 振蕩培養(yǎng)箱時一種可以自動進(jìn)行控溫、濕度和氣體調(diào)節(jié)的培養(yǎng)箱，可以使培養(yǎng)基中，CO2 的濃度與碳酸氫鈉保持平衡。細(xì)胞培養(yǎng)時，一般保持培養(yǎng)箱中保持 2-5% CO2 氣體含量。

3.用于標(biāo)本保存的超低溫冰箱和低溫冰柜（-20 ° C） ：
冰箱和冰柜對于在 2–8°C 下儲存液體培養(yǎng)基以及在 –5°C 到 –20°C 下儲存酶（例如胰蛋白酶）和某些培養(yǎng)基成分（例如谷氨酰胺和血清）都非常重要。
要儲存培養(yǎng)基和緩沖液，需要冰箱或冷藏室。 
需要低溫冰箱來保存預(yù)先分裝的血清、營養(yǎng)物質(zhì)和抗生素。 
低溫儲存
隨著傳代次數(shù)的增加，連續(xù)培養(yǎng)的細(xì)胞系遺傳不穩(wěn)定的可能性很大，因此，有必要制備細(xì)胞的工作原液并保存在低溫儲存中。
需要注意的是，細(xì)胞不應(yīng)儲存在 20 o C 或 -80 o C 的冰箱中，因?yàn)楫?dāng)它們不在這些溫度下儲存時，它們的活力會降低。

4.顯微鏡：
檢查細(xì)胞一般使用倒置顯微鏡即可。
盡管染色體分析或放射自顯影工作需要非常高質(zhì)量的顯微鏡，但放大倍數(shù)為 X100 的簡單的光學(xué)顯微鏡足以在血細(xì)胞計(jì)數(shù)器中進(jìn)行常規(guī)細(xì)胞計(jì)數(shù)。

5 、組織培養(yǎng)器皿：
多種組織培養(yǎng)塑料器皿，最常見的是經(jīng)過特殊處理的聚苯乙烯。 
少量的細(xì)胞培養(yǎng)一般在25 cm2 或 75 cm2培養(yǎng)皿或細(xì)胞培養(yǎng)瓶中進(jìn)行，而后再轉(zhuǎn)移至搖瓶中，置于二氧化碳培養(yǎng)箱中擴(kuò)培，大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)還需要借助生物反應(yīng)器等設(shè)備。

6.清洗消毒設(shè)施：
玻璃器皿如移液器應(yīng)浸泡在合適的清潔劑中，然后經(jīng)過嚴(yán)格的洗滌程序，在干燥和滅菌之前用蒸餾水浸泡。
玻璃器皿如移液管、錐形瓶、燒杯（用鋁箔覆蓋）在 160°C 的熱空氣烘箱中消毒一小時。
所有其他設(shè)備，如自動移液器吸頭和瓶子（蓋子松散連接）均通過 121 °C 高壓滅菌 20 分鐘進(jìn)行滅菌。

7.純水制備或反滲透裝置：
為了準(zhǔn)備培養(yǎng)基和沖洗玻璃器皿，需要雙蒸或反滲透水供應(yīng)。
應(yīng)定期檢查雙蒸水的 pH 值，因?yàn)樵谀承┣闆r下可能會有所不同。
使用的水質(zhì)量的變化可能會導(dǎo)致結(jié)果的變化，因此有必要使用單一來源的水。
通過高壓滅菌將水在 121 °C 下滅菌 20 分鐘。

8.過濾除菌
不能高壓滅菌的培養(yǎng)基必須通過孔徑為 0.22 μm 的膜過濾器進(jìn)行滅菌。

9.離心機(jī)
為了增加細(xì)胞濃度或洗去試劑，細(xì)胞懸液需要進(jìn)行離心操作。
可以使用的離心機(jī)有臺式離心機(jī)、小型離心機(jī)、落地式離心機(jī)和冷凍離心機(jī)等。

其他擴(kuò)展設(shè)備和附加用品：
用于動物培養(yǎng)的其他附加實(shí)驗(yàn)室設(shè)備和耗材如下：
蠕動泵貨真空泵
PH計(jì)
細(xì)胞生物反應(yīng)器【大規(guī)模培養(yǎng)】
共聚焦顯微鏡
流式細(xì)胞儀
細(xì)胞培養(yǎng)瓶
細(xì)胞培養(yǎng)皿
滾瓶或搖瓶、細(xì)胞培養(yǎng)瓶
移液器和移液器吸頭
廢物容器
培養(yǎng)基、血清和試劑
細(xì)胞

1. pH計(jì)：
PH計(jì)是一種計(jì)算溶液中氫離子（酸度或堿度）活度的電子儀器。
pH 計(jì)必須包括連接到 pH 響應(yīng)電極和參考（不變）電極的電壓表。
pH 響應(yīng)電極通常是玻璃，汞-氯化亞汞（甘汞）電極通常是參考電極，但有時也使用銀-氯化銀電極。

2.共聚焦顯微鏡：
共聚焦顯微鏡是一種特殊類型的標(biāo)準(zhǔn)熒光顯微鏡（也稱為寬場熒光顯微鏡），它使用特定的光學(xué)組件產(chǎn)生用熒光探針染色的材料的高分辨率圖像。

3 . 流式細(xì)胞儀：
流式細(xì)胞術(shù)是一種細(xì)胞分析方法，在 1950 年代用于確定流體流中的細(xì)胞體積，當(dāng)它們在觀察孔前流動時，流體流會快速循環(huán)。
流體、光學(xué)和電子是流式細(xì)胞儀的三個主要組成部分。
樣品從樣品管到流動池的傳輸是流式細(xì)胞儀的流體系統(tǒng)的功能。
樣品要么被分選（在細(xì)胞分選機(jī)的情況下），要么在通過流通池（并通過激光）后被運(yùn)送到廢物中。
光學(xué)系統(tǒng)組件包括激發(fā)光源、透鏡和用于在儀器周圍捕獲和移動光的濾光片以及光電流產(chǎn)生檢測系統(tǒng)。

4 . 細(xì)胞培養(yǎng)容器：
所有的培養(yǎng)細(xì)胞的容器起初都是玻璃的。
與塑料相比，玻璃的缺點(diǎn)包括重量大、成本高、清潔勞動強(qiáng)度大和顯微鏡觀察效果差。
1960 年代為聚苯乙烯開發(fā)了表面處理技術(shù)，使塑料容器能夠代替玻璃用于大多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用。

A.。細(xì)胞培養(yǎng)皿：

提供了較佳的經(jīng)濟(jì)性和進(jìn)入生長表面的途徑。

它們應(yīng)該與二氧化碳振蕩培養(yǎng)箱一起使用。
大多數(shù)制造商提供四種培養(yǎng)皿：35 毫米、60 毫米、100 毫米和 150 毫米。
細(xì)胞培養(yǎng)皿主要用于培養(yǎng)貼壁細(xì)胞。

B。 滾瓶：
為了增加貼壁細(xì)胞數(shù)量，一般使用滾瓶、搖瓶培養(yǎng)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶的使用與燒瓶基本相同但勞動力大大減少。

 
C . 移液器和移液管：
血清移液管是一種相對常見的實(shí)驗(yàn)室儀器，用于轉(zhuǎn)移毫升體積的液體。
為了計(jì)算被吸出或分配的液體體積，血清移液管通常沿其側(cè)面有刻度。
這些儀器最常與移液器分液器一起使用，通過產(chǎn)生部分真空來增強(qiáng)液體轉(zhuǎn)移。
根據(jù)您想要通過的體積量，相同的移液器分液器可與多種血清移液器尺寸一起使用。
血清移液管通常是可消毒和可重復(fù)使用的，可以是塑料的、無菌的、一次性的或玻璃的。
對于液體的轉(zhuǎn)移可使用移液器來進(jìn)行操作。

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