用BCA蛋白定量的方法進(jìn)行蛋白定量， 是保羅.史密斯團(tuán)隊(duì)在20 世紀(jì)年代開(kāi)創(chuàng)的 。目前已成為蛋白定量的主要實(shí)驗(yàn)方法。BCA蛋白定量法是蛋白定量實(shí)驗(yàn)中常用的測(cè)定方法之一，除此之外，還有Bradford法和紫外分光光度計(jì)法。 常用的bca蛋白定量試劑盒有碧云天bca蛋白定量,bca蛋白定量試劑盒等。BCA蛋白定量主要分為兩個(gè)步驟：
一是在堿性環(huán)境下將蛋白樣本中的二價(jià)銅離子轉(zhuǎn)換為一價(jià)銅，也就是將CU離子作為顯色劑，這樣的反應(yīng)過(guò)程也被成為雙縮脲 (NH2-CO-NH-CO-NH2) 反應(yīng)。
下面進(jìn)入實(shí)驗(yàn)的第②環(huán)節(jié)，樣本中的蛋白在BCA 與銅離子的參與下進(jìn)一步完成反應(yīng)，形成紫紅色的絡(luò)合物。此時(shí)根據(jù)被還原的二價(jià)銅離子數(shù)估算蛋白質(zhì)濃度的函數(shù)。用分光光度計(jì)測(cè)試562 nm波段 的吸光度。通過(guò)蛋白濃度函數(shù)、吸光度等項(xiàng)與BSA 蛋白標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)比，從而推算出蛋白含量即蛋白定量。
（上圖為： BCA蛋白定量實(shí)驗(yàn)步驟圖）
我們知道在BCA蛋白定量實(shí)驗(yàn)中，蛋白質(zhì)的肽鏈結(jié)構(gòu)會(huì)受主要影響，還有一些螯合劑與還原劑也會(huì)影響到實(shí)驗(yàn)的反應(yīng)過(guò)程，比如常見(jiàn)的EDTA,EGTA,DTT, 還有β- 硫 基乙醇等試劑。一般要求β- 硫 基乙醇的濃度不大于 0.001% ； EDTA 濃度低于 10mM ； 二硫蘇糖醇 DTT 試劑的話需要低于 1mM. 試劑中盡量不要使用 EGTA 強(qiáng)螯合劑。實(shí)踐證明， BCA蛋白定量試劑盒 中低濃度的鹽酸胍等變性劑和 NP-40 等去污劑不會(huì)對(duì)BCA法的 蛋白定量有太大影響， 實(shí)驗(yàn)中可以初步忽略其干擾力。
BCA蛋白定量法是蛋白定量實(shí)驗(yàn)中常用的測(cè)定方法之一，除此之外，還有Bradford 法和紫外分光光度計(jì)法。蘇州阿爾法生物 13年的生物儀器設(shè)備與耗材的行業(yè)經(jīng)驗(yàn)，主要供應(yīng)的實(shí)驗(yàn)室試劑包括干細(xì)胞培養(yǎng)、凝膠成像、 pcr 檢測(cè)、 ECL 發(fā)光、干細(xì)胞培養(yǎng)、 bca蛋白定量試劑盒等相關(guān)系列產(chǎn)品 。
