Vero細胞近年來作為新時代制藥產(chǎn)業(yè)的熱門細胞，成為轉(zhuǎn)基因、蛋白、抗體類制藥企業(yè)普遍使用使用的載體工具。使用細胞生物反應(yīng)器進行Vero細胞的規(guī)模化增殖的接種工藝如下：
一、實驗前準備：
細胞∶Vero 細胞（ATCC級別的 ）、DMEM培養(yǎng)基(Hyclone)、新生牛血清、抗生素、除菌濾膜、CT-3微載體、2L實驗室生物反應(yīng)器，5L搏旅/楚怡細胞培養(yǎng)生物反應(yīng)器、搖瓶、細胞培養(yǎng)瓶、水浴鍋。
二、接種實驗方法
1.微載體的預(yù)處理和滅菌： 接種實驗前的微載體需要用無鈣、鎂離子的PBS磷酸鹽緩沖液進行吸脹、洗滌，之后進行高壓滅菌處理，工藝控制參數(shù)為：吸脹質(zhì)量濃度不超過50 g·L-1，滅菌溫度121 ℃，20 min。
2.轉(zhuǎn)瓶接種操作：
將培養(yǎng)瓶內(nèi)的 Vero 細胞接種于500ML的轉(zhuǎn)瓶內(nèi)，CT-3 微載體濃度為 3g/L，并加入適量的混合牛血清的DMEM培養(yǎng)基，此時接種密度以2.0×10°cells/mL為宜。
在微載體細胞生長過程中，可適當補加微載體 2g/L，使微載體濃度達到 5g/L即可接種在5L細胞培養(yǎng)生物反應(yīng)器中作為種子細胞進行培養(yǎng)。
3.規(guī)模擴培接種操作
當細胞生長到達一定密度時，將細胞及新的微載體一起轉(zhuǎn)入大容積的微載體培養(yǎng)養(yǎng)反應(yīng)器中，進行細胞培養(yǎng)。此過程的工藝參數(shù)為：溫控： 37士0.1℃，溶解氧為 50%空氣飽和度，攪拌器的轉(zhuǎn)速維持在20～32 r/min即可。當細胞密度達 1.1×10'cells/mL時，即可進入下游環(huán)節(jié)進行產(chǎn)品生產(chǎn)。
介于國外生物反應(yīng)器成本高昂，售后服務(wù)不便，型號固定、貨期長等因素，我國自主研發(fā)設(shè)備生產(chǎn)的生物反應(yīng)器目前已廣泛應(yīng)用于制藥生產(chǎn)、新藥開發(fā)、蛋白研發(fā)、轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品等環(huán)節(jié)，一些國內(nèi)生物反應(yīng)器專業(yè)生產(chǎn)商甚至可根據(jù)客戶要求的尺寸進行定制化操作,比如搏旅除生產(chǎn)固定型號規(guī)格外，還可以根據(jù)客戶要求定制不同級別、規(guī)格的生物反應(yīng)器、發(fā)酵罐主要用于微生物培養(yǎng)、種子制備、浮細胞培養(yǎng)、貼壁細胞培養(yǎng)、微載體培養(yǎng)等，實現(xiàn)了廠商直供，一罐多用，滿足不同的用戶需求。
